如何为您的实验室选择合适的梯度 PCR？

梯度 PCR 不是一种实际的 PCR。它是传统 PCR 的一种变体，通过精确定位精确的退火温度，可以更轻松地优化 PCR 反应。PCR 允许扩增无限数量的扩增子，或感兴趣基因的拷贝，然后用于后续的分子应用。

进一步的应用包括诊断遗传病、进化研究、系统发育分析和 DNA 条形码。然而，PCR 的主要目标是有效、精确和高产量地扩增 DNA。此外，任何 PCR 反应的灵敏度和特异性都至关重要。

为了实现我们的目标，必须利用温度变化、MgCl2、缓冲液和各种循环条件来优化反应。本指南将讨论如何为您的实验室选择正确的梯度 PCR。

什么是梯度 PCR？

这 梯度PCR仪 可以在一次运行中使用多个优化实验来准确确定退火温度。梯度 PCR 还可以确定退火温度和其他因素，例如 MgCl2、缓冲液和引物的理想浓度。梯度 PCR 机具有与常规 PCR 相同的结构组件。它由电源按钮、显示屏、上加热盖和下加热块组成。

PCR 可以快速改变温度。它在瞬间在每个步骤之间变化。梯度 PCR 机的下部加热块与常规 PCR 不同。它的下部加热块有不同的加热柱。它包含 12 根柱子，每对柱子都有一个加热块。每对加热块之间的温度变化 >0.5°C 和 5°C 是可能的。

但是，每行的温度与相应列的温度保持相同。因此，梯度 PCR 的强大功能使我们能够在短时间内分析 PCR 反应的六种备选退火温度。

梯度 PCR 解决方案：四 E 的 Scientific 的 PC Optima 96

Gradient PCR Optima 96 是 Four E's Scientific 的产品。该机器将三台独立的 PCR 机器合二为一，使其不仅仅是一台梯度 PCR 机器。我们始终可以在此 PCR 设备上运行三个独立的协议。此外，每个网格中的三个都有一个梯度平台，允许在单个实验中进行更大的优化。

它为 PCR 优化提供温度控制，因为它有六个独立的温度块。该机器具有更快的加热和冷却速度，带有用于梯度 PCR 协​​议导出和导入的 USB。

常规 PCR 和梯度 PCR 有什么区别？

常规 PCR 和梯度 PCR 之间的主要区别在于，常规 PCR 仅具有单个加热单元并在孔中传输单个温度。另一方面，梯度 PCR 在几对柱中有多个温度区。它有大约六个加热单元，这意味着六个退火温度分布在孔中。

与传统 PCR 相比，梯度 PCR 有哪些优势？

与传统 PCR 相比，四 E 的科学梯度 PCR 的主要优点是速度快。对于使用聚合酶链反应 (PCR) 进行测序、克隆、基因分型、诱变和各种其他用途的科学家来说，梯度 PCR 是实验室设备的重要组成部分。它具有准确的 PCR 退火温度梯度，可在单次运行中简化 PCR 检测。

传统的 PCR 需要时间，因为它只有一个加热块。梯度 PCR 以最少的步骤确定最佳退火温度。

为什么使用梯度 PCR？

您需要使用梯度 PCR 来增强 PCR 反应。PCR 扩增涉及使用 PCR 中的梯度来确定理想的退火温度。梯度是标准 PCR 的一种变体，通过确定精确的退火温度，可以更轻松地优化 PCR 过程。

梯度 PCR 机可用于在单次运行中进行多项优化测试，以准确确定退火温度。它也可以用于多种用途

选择梯度 PCR 时需要考虑的事项

以下是选择梯度 PCR 时需要考虑的一些事项：

1. 整个热块的温度精确且恒定

由于三个主要的 PCR 过程与温度有关，因此热循环仪温度的精度可能会影响 PCR 的成功与否。为了产生准确和可重复的 PCR 结果，热块上的孔间温度恒定是必不可少的。所使用的热循环仪必须在整个块中尽可能精确和均匀地达到所需的温度。

使用温度验证套件进行定期测试并在必要时由合格专家重新校准是实现热精度的两种方法。

2. 引物退火优化的精确温度控制

有助于优化 PCR 中引物退火的热循环仪的一个特征是梯度温度控制。为了同时评估多个温度以获得理想的引物退火，梯度设置旨在实现整个块的温度变化，通常在每个泳道中以 2°C 的增量或减量。

理论上，真正的梯度将显示整个块的线性温度。另一方面，梯度热循环仪通常只有一个热块，其温度仅由两个加热和冷却元件管理，每端一个。

3. 实现准确的样品温度：升温速率、保持时间、

和算法

为了使 PCR 实验准确有效，热循环仪必须能够准确地管理样品温度。样品温度的精确管理取决于特定于仪器的因素，包括升温速率、保持时间和预测样品温度的算法。

热循环仪的升温速率，通常以摄氏度/秒 (°C/sec) 报告，表示温度随时间从一个 PCR 步骤到另一个步骤的转变。热块的加热和冷却分别称为“上升斜坡”和“下降斜坡”。样品经历较慢的斜坡速率（比块），因为热能转移需要时间从块到碎片。因此，有必要区分和理解以下斜坡率的定义：

● 模块在升温期间的短时间内可以实现的最快温度变化被定义为最大或峰值模块升温速率。

● 衡量热循环仪速度的更准确方法是使用平均块升温速率，它测量温度在较长时间内的变化率。

● 样品实际达到的温度由最大样品升温速率和平均样品升温速率反映。因此，使用样品升温速率可以更准确地比较热循环仪的性能及其对 PCR 的可能影响。

结论

扩增是一项耗时且昂贵的操作。因此，高端优化对于降低成本和节省时间至关重要。PCR 梯度使扩增变得容易

节省时间、试剂和耗材。依赖于温度的优化满足了对额外 PCR 或试剂的需求。获得其中之一 四 E 科学梯度 PCR今天开始吧。